Plateaux techniques

Frédéric Duval, Ph.D., Coordonnateur technique

frederic.duval.cemtl@ssss.gouv.qc.ca

(514) 252-3400 poste 3521 ou 6139

Anne-Marie Aubin, M.Sc., Assistante de recherche

anne-marie.aubin.cemtl@ssss.gouv.qc.ca

(514) 252-3400 poste 3521 ou 6139

INTRO

La cytométrie en flux est une technique d’analyse des caractéristiques physiques et fonctionnelles de chaque cellule au sein d’une suspension cellulaire. Ainsi, on peut évaluer les proportions de différentes sous-populations cellulaires présentes dans le milieu a très grande vitesse (plusieurs milliers de cellules par seconde). Cette technique permet une mesure précise et rapide de paramètres tels que la taille des cellules, leur nature, leur contenu en ADN ainsi que la présence de molécules spécifiques à leur surface, intracellulaires ou intranucléaires. Ces molécules sont détectées à l’aide de sondes fluorescentes qui sont excitées par des lasers.
Notre plateforme est équipée d'instruments de cytométrie spectrale et conventionnelle à la fine pointe de la technologie permettant ainsi de réponde aux exigences variées de la recherche en santé. Nous disposons de cinq analyseurs et de deux trieurs, disponibles tant en interne qu'en externe. Tous nos équipements font l'objet d'un entretien régulier, de calibrages et d'évaluations de performance pour garantir la fiabilité et la reproductibilité des données.

Les membres de notre équipe fournissent une formation approfondie aux utilisateurs, les accompagnant à chaque étape, de la conception de leurs panels de fluorochromes à l'analyse des résultats, en passant par l'optimisation des étapes clés de leur expérience.

Nos trieurs de cellules ARIA III et Cytek sont munis d'une hotte à pression négative permettant le tri d'échantillons potentiellement infectieux, y compris les cellules humaines provenant de donneurs sains. Cependant, l'approbation du comité de biosécurité est requise pour tout échantillon provenant de primates ou de cellules génétiquement modifiées non fixées.

NOTRE MISSION

Entretenir, Calibrer, évaluer la performance des instruments pour assurer l’obtention de résultats reproductibles tant au niveau de l’analyse que du tri cellulaire.


Former les usagers pour leur permettre d’atteindre leurs objectifs tant au niveau expérimental que théorique sur tous les sujets en rapport avec la cytométrie en flux (design expérimental, design de panel, acquisition, analyse, etc.).

Grace à nos appareils à spectre complet nous pouvons trier et analyser jusqu’à 40 paramètres fluorescents différents en plus d’extraire l’autofluorescence des échantillons garantissant ainsi l'obtention d’une résolution inégalée.

Analyse multiparamétrique (liste non exhaustive)

• Immunophénotypage;
• Cycle cellulaire, quantification de l’ADN et prolifération;
• Étude des espèces réactives de l'oxygène;
• Viabilité et mort cellulaire;
• Évaluation de la cytotoxicité d’une drogue ou d’un type cellulaire;
• Flux calcique;
• pH intracellulaire;
• Potentiel de la membrane cytoplasmique et mitochondriale;
• Phagocytose et autophagie;
• Autres;

Tri cellulaire à haut débit en condition aseptique

• NC2+;
• 1 à 6 populations simultanées en tubes, plaques ou sur lames;
• Cellules uniques;
• Jusqu’à 40 paramètres fluorescents;

Formation et soutien

• Acquisition sur les appareils BD Biosciences;
• Acquisition sur les appareils Cytek;
• Formations théoriques et ou pratiques personnalisables allant de la création d'expérience impliquant la cytométrie en flux à l'analyse des résultats;

Logiciels

• FlowJoTM;
• CellEngineTM;
• Cytobank;
• FluoroFinder, version Premium;

Station d’analyse

• Équipée d’un MacBook Pro (16 pouces) 96 GB RAM;
• Deux grands écrans (>32 pouces);
• Souris sans fil;
• Adaptateur pour câble internet;
• Adaptateur pour prise USB-C/USB-A;

1. Avant d'accéder aux équipements de la plateforme, tous les utilisateurs doivent suivre une formation dispensée par un membre de l'équipe de la plateforme. Les utilisateurs ne sont pas autorisés à former de nouveaux utilisateurs. En plus d’offrir un support continu allant de la conception expérimentale à l'analyse des données, la plateforme propose deux types de formations :
   • Utilisation des Analyseurs BD (BD LSRII; BD FACSCelesta; BD LSRFortessa X-20);
   • Utilisation de l'Analyseur Cytek Aurora.
2. Chaque utilisateur doit réserver l'instrument de son choix ainsi que la plage horaire qui lui convient via le logiciel Midas. Après chaque utilisation, il est de la responsabilité de l'utilisateur de mettre à jour sur Midas le temps réellement utilisé sur l'instrument. La facturation de tous les équipements de la plateforme est basée sur les réservations effectuées sur Midas. Un tutoriel est disponible sur l’intranet dans Enseignement, recherche et innovation, Recherche, Infrastructures, Réservations.
3. Si un utilisateur ayant réservé se présente alors que vous utilisez encore l'instrument, il vous sera demandé de libérer immédiatement l'instrument pour lui permettre de commencer son travail.
4. Il est de votre responsabilité de contacter la personne réservée après vous si vous terminer plus tôt que ce que vous aviez prévu et réservé sur Midas. 
5. Les réservations excessives ne sont pas autorisées.
6. L'utilisateur est responsable d'éteindre le cytomètre s'il est le dernier à l'utiliser.
7. Si le dernier utilisateur doit annuler sa réservation, il doit contacter la plateforme pour demander l'extinction de l'instrument ou venir l'éteindre lui-même. Aucun instrument ne peut rester allumé la nuit ou le week-end.
8. Après chaque utilisation, les fichiers FCS enregistrés doivent être supprimés du logiciel d'acquisition (DIVA ou SpectroFlo) et du disque dur de l'ordinateur. Il est recommandé d'exporter les expériences sur un disque dur externe si une réutilisation de cette expérience est envisagée.
9. La plateforme de cytométrie n'est pas responsable du stockage des données. L’utilisateur est le seul responsable de ses données. La plateforme se réserve le droit de supprimer toutes les données sans préavis.
10. Aucun logiciel ne doit être installé sur les ordinateurs de la plateforme sans l'autorisation des coordonnateurs.
11. Il est impératif de reconnaître la plateforme dans toute publication utilisant des données de cytométrie et de lui envoyer une copie de l'article.
12. Un support continu est offert par les coordonnateurs de la plateforme, du design expérimental à l’analyse des données de cytométrie ainsi que des formations spécifiques sur demande.  

Formulaire de tri potentiellement infectieux F-28

• À remplir sur le logiciel Nagano

Formulaire d’aide au tri

• Informations concernant les tris cellulaires au CR-HMR.pdf

PNF CY-01_Manipulation d'echantillons potentiellement infectieux et de cellules humaines a la plateforme de cytometrie_Version 1.1.pdf

Mikhail Sergeev, Ph.D.

mikhail.sergeev@umontreal.ca

(514) 252-3400 poste 5095

INTRO

Le flux de travail typique pour la bioimagerie est la suivante:

Un étudiant, post-doc et/ou assistant de recherche me contacte.

Nous discutons des détails du projet :

• contexte scientifique
• question biologique

Nous discutons des équipements les plus adaptés :

• les bio-essais et les instruments de microscopie correspondants
• réactifs (lignées cellulaires, plasmides, méthodes de transduction, biomarqueurs, matériel de microscopie, etc.)

Formation

• session initiale (peut être un petit groupe)
• formation individuelle
• formation de suivi

Nous discutons des stratégies d'analyse des images.

La plate-forme de bioimagerie met à la disposition des chercheurs du CRHMR des équipements de pointe en microscopie optique, formations en microscopie et le soutien dans le développement d'expériences de microscopie à venir.

Liste des appareils - Bioimagerie_FR.pdf

La plateforme est également équipée d’un ophtalmoscope à balayage laser Heidelberg modèle HRA2 pour des applications d’imagerie de la rétine sur des animaux vivants. Cet instrument permet une exploration fonctionnelle de la vision in vivo. Pour plus de détails, veuillez vous référer à la liste des équipements sous la section « Animalerie ».